?فرآیند Rt-qPCR?

✅ فرآیند reverse transcription quantitative real-time PCR یا به اختصار Rt_qPCR برای شناسایی، تشخیص و کمی سازی نوکلئیک اسیدهاست.

✔️ این پروسه، یک نسخه از تکنیک PCR سنتی است که ترکیبی از رونویسی معکوس و qPCR (PCR کمی) می‌باشد.

✔️ هدف Rt-qPCR:
اندازه گیری مقدار RNA در یک نمونه

✅ شیوه انجام:
1️⃣در Rt_qPCR، ابتدا RNA با استفاده از آنزیم reverse transcriptase به DNA مکمل (cDNA) تبدیل می‌شود.
2️⃣سپس cDNA با استفاده از qPCR تقویت می‌شود و مولکول‌های خاص RNA موجود در نمونه اندازه گیری می شوند.

? این تکنیک به طور معمول برای مطالعه سطوح بیان ژن و تحلیل نمونه‌های RNA در حوزه‌های مختلف تحقیقاتی، از جمله بیولوژی مولکولی، ژنتیک و تشخیصی استفاده می‌شود.

#تست_مولکولی
#Rt_qPCR
➿➿➿➿➿➿➿➿◽️◾️
??‍? آکادمی تخصصی لب‌هاب ?
? @Lab_Hub ?

?فرآیند qPCR || ادامه نکات

⚠️ انواع qPCR:
انواع مختلفی از روش‌های qPCR وجود دارد، از جمله:
?SYBR Green qPCR
?"TaqMan" qPCR.

⚡️ کاربردهای qPCR:
?فرآیند qPCR به‌طور معمول برای کمیت‌سنجی سطوح بیان ژن، اندازه‌گیری بار ویروسی در عفونت‌ها، تشخیص جهش‌های ژنتیکی، تجزیه و تحلیل جمعیت‌های میکروبی، و ارزیابی آسیب یا فرآیندهای ترمیم DNA استفاده می‌شود.

? مزایا:
?تکنیک qPCR نسبت به PCR سنتی، کمیت‌سنجی به‌صورت زمان واقعی، حساسیت بالا، دامنه پهن و خصوصیت عالی را فراهم می‌کند.

?نیاز به حداقل ورودی نمونه را دارد و می‌توان آن را برای تجزیه و تحلیل با سرعت بالا استفاده کرد.

?علاوه بر این، qPCR امکان چندگانه‌سازی را فراهم می‌کند، به این معنی که ژن‌های هدف مختلف می‌توانند به طور همزمان تجزیه و تحلیل شوند.

? محدودیت‌ها:
❗️در qPCR برای هر ژن هدف، نیاز به پرایمرها و پروب‌های خاص است که این امر آن را برای مطالعه توالی‌های جدید یا ناشناخته سخت‌تر می‌کند.

#تست_مولکولی
#qPCR
➿➿➿➿➿➿➿➿◽️◾️
??‍? آکادمی تخصصی لب‌هاب ?
? @Lab_Hub_ir ?

?فرآیند qPCR?

✅فرآیند qPCR (مخفف quantitative polymerase chain reaction)، یک تکنیک بیولوژی مولکولی (زیر مجموعه‌ای از تکنیک PCR) که برای سنجش مقدار DNA یا RNA موجود در نمونه استفاده می‌شود.

✔️ تکنیک qPCR شامل تکثیر توالی‌های DNA یا RNA از طریق چرخه‌های تکراری گرم شدن و سرد شدن است.

⚡️با این‌حال، در qPCR پروب های فلورسانت یا رنگدانه های فلورسانت را که سیگنال‌هایی به تناسب مقدار DNA یا RNA موجود در نمونه تولید می‌کنند، شامل می‌شود.

⚠️ مراحل qPCR:

⌨️ابتدا، نمونه با جدا کردن و تصفیه DNA یا RNA مورد نظر آماده می‌شود
2️⃣سپس پرایمرهای خاص و پروب یا رنگدانه فلورسانت به محلول واکنش اضافه می‌شوند.
3️⃣پرایمرها به توالی‌های هدف متصل می‌شوند و پروب به یک منطقه تکمیلی در داخل توالی هدف متصل می‌شود.

?در طول چرخه PCR تکثیر DNA صورت می گیرد و فلورسانس توسط پروب پس از هر چرخه به صورت زمان واقعی اندازه‌گیری می‌شود.

#تست_مولکولی
#qPCR
➿➿➿➿➿➿➿➿◽️◾️
??‍? آکادمی تخصصی لب‌هاب ?
? @Lab_Hub_ir ?

?فرآیند RT-PCR?

? فرآیند Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction یا به اختصار RT-PCR، یک تکنیک آزمایشگاهی (زیرمجموعه‌ای از تکنیک PCR) است که برای سنجش مولکول‌های RNA در نمونه به کار می رود.

➖➖➖➖➖➖➖➖
? مراحل RT-PCR :

✅ ابتدا، مولکول‌های RNA موجود در نمونه جدا شده و تصفیه می‌شوند. سپس واکنش رونویسی معکوس اتفاق می‌افتد، جایی که آنزیمی به نام reverse transcriptase مولکول RNA را به DNA مکمل (cDNA) تبدیل می‌کند.

? [این مرحله ضروری است؛ زیرا PCR تنها قادر به تقویت DNA و نه RNA است.]
✅ بعد از سنتز cDNA، تقویت PCR رخ می‌دهد.
پرایمرهای خاص، منطقه مورد نظر از رشته DNA را فرا می‌گیرند و آنزیم DNA پلیمراز، پرایمرها را گسترش می‌دهد و نسخه‌های چندتایی از DNA هدف را ایجاد می‌کند. تقویت از طریق چرخه‌های گرمایش و سرد کردن در دستگاه سیکل ترمال اتفاق می‌افتد.

✅ در هر چرخه، زنجیره‌های DNA جدا می‌شوند (تجزیه) ، پرایمرها به دنباله‌های مکمل خود متصل می‌شوند (انعقاد) و آنزیم DNA پلیمراز زنجیره‌های جدید DNA را سنتز می‌کند (گسترش).
این فرآیند تعداد کپی‌های دنباله DNA هدف را به صورت نمایی افزایش می‌دهد.

➖➖➖➖➖➖➖➖
? کاربرد RT-PCR :
?این فرآیند در تحقیقات زیست‌شناسی مولکولی به دانشمندان امکان می‌دهد تا سطح بیان ژن‌ها را با سنجش مقدار RNA موجود در نمونه بررسی کنند.

?همچنین برای مطالعه ژن‌هایی که تنها در شرایط خاص یا در بافت‌های خاص فعال هستند، مفید است.

?در تشخیص بالینی نیز، RT-PCR برای تشخیص RNA ویروسی مانند COVID-19 استفاده می‌شود.

#تست_مولکولی
#RT_PCR
➿➿➿➿➿➿➿➿◽️◾️
??‍? آکادمی تخصصی لب‌هاب ?
? @Lab_Hub_ir ?

?فرآیند PCR?

✅ فرآیند PCR یا واکنش زنجیره‌ای پلیمراز  (polymerase chain reaction) یک تکنیک آزمایشگاهی متداول و ضروری است که قطعه‌ای از DNA را به میلیون ها برابر همانندسازی و تکثیر می‌کند.

⚠️فرآیند PCR دو دسته کلی دارد:

1️⃣دسته کیفی⬅️نوع میکروارگانیسم
2️⃣دسته کمی⬅️تعداد میکروارگانیسم‌ها را آشکار می‌کند.

➖➖➖➖➖➖➖➖
? مراحل انجام PCR:

⌨️ دناتوره کردن (Denaturation):
در این مرحله مولکول‌های دو رشته‌ای DNA الگو، به وسیله حرارت بالا (حدود 94 درجه سانتی گراد) از یکدیگر جدا شده و به مولکول‌های تک رشته‌ای تبدیل می‌شوند.

2️⃣ جفت شدن (Annealing):
در این مرحله کاهش دما صورت می‌گیرد تا پرایمر‌ها بتوانند با توالی‌های مکمل خودشان روی رشته های الگو جفت شوند. این دما بسته به نوع پرایمرها متغیر است که معمولا از دمای 55 درجه سانتی گراد استفاده می شود.

3️⃣ طویل سازی (Extension):
در این مرحله آنزیم Taq DNA پلیمراز، پرایمرها را روی DNA تک رشته‌ای امتداد می‌دهد تا DNA دو رشته ای جدید ساخته شود. درجه حرارت مورد استفاده در این بخش 72 درجه سانتی گراد می‌باشد.

➖➖➖➖➖➖➖➖

? برخی از کاربرد های PCR:

?تحقیقات ژنتیکی
?تشخیص بیماری های عفونی و ژنتیکی
?شناسایی عوامل بیماری زا مانند ویروس
?آزمایشات پزشکی قانونی و تشخیص جنایی
?مطالعات محیط زیست و درک تنوع میکروبی و فرآیندهای اکولوژیک

➖➖➖➖➖➖➖➖
?نکته ۱: با تکرار هر دور از PCR، مقدار DNA هدف موجود در واکنش دو برابر می شود.

?نکته ۲: نمونه PCR می‌تواند از نواحی مختلف مانند پوست و مایعات و بزاق دهان باشد.

#تست_مولکولی
#PCR
➿➿➿➿➿➿➿➿◽️◾️
??‍? آکادمی تخصصی لب‌هاب ?
? @Lab_Hub_ir ?

?استخراج RNA?

✅ مراحل استخراج RNA?

⌨️ جمع آوری نمونه:
نمونه زیستی مانند بافت و سلول جمع آوری می شوند.از آنجا که RNA توسط RNase قابل تجزیه است، بنابراین باید تماس با RNase را کاهش دهیم.

2️⃣ لیز سلول:
در این مرحله غشای سلولی تخریب شده و محتوای سلولی آزاد می شود.روش های مختلف لیز شامل: خرد کردن مکانیکی، هضم آنزیمی یا لیز شیمیایی.

3️⃣ استحکام RNA:
برای جلوگیری از تجزیه،باید RNA استخراج شده را با اعمالی چون افزودن ترکیبات مهار کننده RNase یا سرمایش نمونه در نیتروژن مایع استحکام بخشید.

4️⃣ استخراج RNA:
برای جداسازی RNA از سایر مولکول های سلولی مانند DNA و پروتئین‌، پردازش صورت می گیرد.
در یکی از روش ها، پس از افزودن کلروفرم به نمونه، آن را تحت شرایط ویژه‌ای سانتریفیوژ کرده که در پایان، سه فاز تفکیکی (به ترتیب از پایین به بالا پروتئین، DNA و RNA) حاصل می‌ شود.

*5️⃣ *تصفیه RNA:
سپس RNA به دست آمده برای حذف آلاینده های باقیمانده، مطابق روش های معمول تصفیه مانند رسوب الکل، تصفیه مبتنی بر ستون و یا تصفیه مبتنی بر مغناطیس،تصفیه می شود.

*6️⃣ *اندازه گیری و ارزیابی کیفیت RNA: کمیت و کیفیت RNA تصفیه شده با استفاده از اسپکتروفتومتری و الکتروفورز سنجیده می شود.

*7️⃣ *ذخیره سازیRNA:
همچنین RNA تصفیه شده می تواند در دمای (-80 درجه سانتیگراد) برای بلند مدت ذخیره شود.

#تست_مولکولی
#استخراج_RNA
➿➿➿➿➿➿➿➿◽️◾️
??‍? آکادمی تخصصی لب‌هاب ?
? @Lab_Hub_ir ?

?استخراج RNA?

✔️ استخراج RNA فرآیندی است شامل جداسازی و تصفیه مولکول‌های RNA از نمونه‌های زیستی.
مولکول RNA یا اسید ریبونوکلئیک، مولکولی حیاتی است که در فرآیندهای سلولی مختلف مانند بیان ژن و سنتز پروتئین نقش دارد.

? چندین روش استخراج RNA وجود دارد، مانند استخراج فنل-کلروفرم، تصفیه مبتنی بر ستون و استخراج مبتنی بر مغناطیس.
این روش ها شامل استفاده از بافرها، حلال های آلی و مراحل مرکز گردانی برای جداسازی انتخابی RNA هستند.

? برای استخراج RNA نمی توان از شیوه های استخراج DNA استفاده کرد؛ زیرا ضمن تفاوت ساختار و تعداد رشته های این دو مولکول، DNA نسبت به RNA حساسیت بالاتری در برابر عوامل محیطی چون دما و ریبونوکلئاز ها دارد.
بنابراین، شرایط استخراج هرکدام متفاوت است.

? نکته حائز اهمیت آن است که در استخراج RNA، با توجه به نوع نمونه زیستی، کاربرد های مدنظر و حساسیت مولکول های RNA گوناگون، شیوه استخراج و پروتکل های آن متفاوت است.

#تست_مولکولی
#استخراج_RNA
➿➿➿➿➿➿➿➿◽️◾️
??‍? آکادمی تخصصی لب‌هاب ?
? @Lab_Hub_ir ?

?عرض خیرمقدم خدمت دوستانی که تازه به جمع ما پیوستند

✔️عزیزان با کلیک بر روی نوشته‌های هایپرلینک زیر، به‌راحتی می‌توانند از مطالب کانال استفاده کنند?
➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖

?تهیه لام بافت شناسی (۱)

?تهیه لام بافت شناسی (۲)

?انواع Fixation بافت (۱)

?انواع Fixation بافت (۲)

?روش‌های رنگ‌آمیزی بافت (۱)

?روش‌های رنگ‌آمیزی بافت (۲)

?استخراج DNA

#مروری_بر_مطالب
➿➿➿➿➿➿➿➿◽️◾️
??‍? آکادمی تخصصی لب‌هاب ?
? @Lab_Hub_ir ?

*?استخراج DNA?***

✅استخراج DNA فرآیند جداسازی DNA از سلول‌ها و بافت ها برای تجزیه و تحلیل بیشتر است. این مرحله در فرآیندهایی چون PCR، توالی گیری DNA و آزمایش ژنتیک حائز اهمیت است.

? براساس منبع DNA (مانند خون، بافت، سلول)و کاربردهای مورد نظر، پروتکل‌ها و کیت‌های مختلفی برای استخراج DNA وجود دارد.
انتخاب روش استخراج بر اساس عواملی مانند اندازه نمونه، نیازهای خلوص و وجود مهارکننده‌ها متغیر می باشد.

?مراحل کلیدی استخراج DNA:

1⃣ لیز سلول:
این مرحله شامل شکستن غشای سلول‌ و پوسته هسته ای برای آزادسازی DNA است.روش‌های مختلفی برای لیز سلول استفاده می شود؛ مانند خرد کردن مکانیکی، هضم آنزیمی یا استفاده از detergent.

2⃣ تصفیه DNA:
این مرحله به معنای جداسازی DNA از سایر اجزای سلولی مانند پروتئین‌ها، RNA و لیپیدها است. روش‌های مختلفی برای تصفیه DNA وجود دارد مانند استفاده از فنل-کلروفرم.

3⃣ رسوب DNA:
این مرحله شامل افزودن یک محلول نمک (مانند استات سدیم) و الکل (مانند اتانول) به محلول DNA است. نمک و الکل باعث متمرکز شدن مولکول‌های DNA و تشکیل رسوب قابل مشاهده می‌شوند.

4⃣ روان‌سازی DNA:
رسوب DNA با یک بافر شسته می‌شود تا آلودگی ها یا نمک باقی مانده حذف شوند.در نهایت، DNA در یک بافر مناسب یا آب برای ذخیره سازی یا تجزیه و تحلیل بیشتر روان می‌شود.

#تست_مولکولی
#استخراج_DNA
➿➿➿➿➿➿➿➿◽️◾️
??‍? آکادمی تخصصی لب‌هاب ?
? @Lab_Hub_ir ?